La tecnología microbiana ofrece una alternativa ecológica para la síntesis de nanomateriales de valor añadido. En particular, los compuestos fúngicos pueden mejorar la producción de nanopartículas de plata, estabilizando nanopartículas coloidales. Basado en un estudio previo de nuestro grupo, las nanopartículas de plata obtenidas utilizando los extractos celulares extracelulares libres de células (PchNPs) han mostrado actividad antimicrobiana y antibiofilm contra bacterias Gram-negativas. Además, la nisin, un bacteriocina ampliamente utilizada como conservante natural de alimentos, ha ganado recientemente mucha atención debido a su acción antimicrobiana contra bacterias Gram-positivas en aplicaciones biomédicas. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue conjugar nanopartículas de plata biogénicas (PchNPs) con nisin para obtener nanoconjugados (PchNPs@nis) con propiedades antimicrobianas mejoradas. Se realizaron ensayos de caracterización para determinar las propiedades fisicoquímicas de PchNPs@nis, y también se estudiaron sus actividades antibacterianas y antibiofilm. La formación de PchNPs@nis fue confirmada por análisis de espectroscopía UV-Vis, TEM y Raman. Diferentes nanobioconjugados PchNPs@nis mostraron valores de diámetro en el rango de 60-130 nm por DLS y valores de carga superficial entre -20 y -13 mV. La nisin mostró una excelente afinidad por PchNPs, con eficiencias de unión superiores al 75%. Los nanobioconjugados PchNPs@nis sintetizados de manera estable no solo fueron capaces de inhibir la formación de biofilm, sino que también mostraron inhibición del crecimiento celular planctónico de, ampliando el espectro de acción de los antimicrobianos no conjugados contra bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. En conclusión, estos resultados muestran la prometedora aplicación de PchNPs@nis, preparados a través de tecnología verde, como potenciales nanomateriales antimicrobianos.