Este estudio investigó cómo el 2,4-epibrassinolida (EBR) exógeno y el óxido nítrico (NO) mejoran la tolerancia de las plántulas de pepino (L.) al estrés alcalino inducido por NaHCO en condiciones hidropónicas. La exposición a NaHCO causó una severa toxicidad por sodio, acumulación de especies reactivas de oxígeno (ROS) e inhibición fotosintética, que, en conjunto, suprimieron el crecimiento de las plantas. Los tratamientos con EBR o NO mejoraron significativamente el rendimiento de las plantas al aliviar estos efectos adversos. Ambos reguladores mejoraron el sistema de eliminación de ROS, mantuvieron la homeostasis iónica y aliviaron la toxicidad por sodio. También estimularon las actividades de la H-ATPasa vacuolar, H-PPasa y H-ATPasa de la membrana plasmática, y aumentaron la acumulación de ácidos cítrico y málico, manteniendo así una mayor eficiencia fotosintética bajo condiciones de estrés. El análisis de qRT-PCR reveló además que EBR y NO regulaban al alza y (transportadores de sodio) así como y (acuaporinas), confirmando su participación en la regulación iónica y osmótica. Los experimentos farmacológicos mostraron que la aplicación de inhibidores de la síntesis de NO, incluidos el tungstato y L-NAME, así como el eliminador de NO cPTIO, debilitó notablemente los efectos protectores de EBR. En contraste, la aplicación del inhibidor de biosíntesis de brassinosteroides brassinazol (BRz) solo tuvo un efecto limitado en la tolerancia al estrés mediada por NO. En conjunto, estos hallazgos demuestran que NO actúa como un mediador de señalización en la vía de EBR, coordinando múltiples vías de defensa que incluyen la regulación fotosintética, la protección antioxidante, el equilibrio iónico, la actividad de acuaporinas y el metabolismo de ácidos orgánicos para mejorar la resistencia del pepino al estrés alcalino.