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Una PCR en tiempo real optimizada para evitar la inhibición asociada a especies/tejidos para la detección de H5N1 en tejidos de hurón y mono.
La diagnóstica de PCR en tiempo real para el virus de la influenza aviar H5N1 en muestras de tejido a menudo es subóptima, ya que los inhibidores de PCR naturalmente presentes en las muestras, o la coincidencia inesperada de los cebadores con el genoma de una especie no secuenciada. Con el objetivo principal de optimizar el método de PCR en tiempo real con SYBR Green para detectar H5N1 en muestras de tejido de hurón y mono (macaco rhesus chino), examinamos varios pares de cebadores específicos del gen H5N1 y probamos su capacidad para detectar de manera sensible y específica los transcritos de H5N1 en los tejidos animales infectados, luego evaluamos el rendimiento y la calidad del ARN comparando los valores de Ct obtenidos del método estándar Trizol, y cuatro kits de aislamiento de ARN comúnmente utilizados con pequeñas modificaciones, incluyendo Roche High Pure, Ambion RNAqueous, BioMIGA EZgene y Qiagen RNeasy. Los resultados indicaron que
Autores: Zhan, LingJun; Bao, LinLin; Li, FengDi; Lv, Qi; Xu, LiLi; Qin, Chuan
Idioma: Inglés
Editor: The Scientific World Journal
Año: 2012
Disponible con Suscripción Virtualpro
Artículos
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 11
Citaciones: Sin citaciones
Hindawi
The Scientific World Journal
Volume , Article ID 907095, 5 pages
https://doi.org/10.1100/2012/907095
Zhan LingJun, Bao LinLin, Li FengDi, Lv Qi, Xu LiLi, Qin Chuan
Key Laboratory of Human Diseases Comparative Medicine, Ministry of Health China, Key Laboratory of Human Diseases Animal Model ChinaAcademic Editor: Pharr Gregory T.
Contact: @hindawi.com
La diagnóstica de PCR en tiempo real para el virus de la influenza aviar H5N1 en muestras de tejido a menudo es subóptima, ya que los inhibidores de PCR naturalmente presentes en las muestras, o la coincidencia inesperada de los cebadores con el genoma de una especie no secuenciada. Con el objetivo principal de optimizar el método de PCR en tiempo real con SYBR Green para detectar H5N1 en muestras de tejido de hurón y mono (macaco rhesus chino), examinamos varios pares de cebadores específicos del gen H5N1 y probamos su capacidad para detectar de manera sensible y específica los transcritos de H5N1 en los tejidos animales infectados, luego evaluamos el rendimiento y la calidad del ARN comparando los valores de Ct obtenidos del método estándar Trizol, y cuatro kits de aislamiento de ARN comúnmente utilizados con pequeñas modificaciones, incluyendo Roche High Pure, Ambion RNAqueous, BioMIGA EZgene y Qiagen RNeasy. Los resultados indicaron que
Descripción
La diagnóstica de PCR en tiempo real para el virus de la influenza aviar H5N1 en muestras de tejido a menudo es subóptima, ya que los inhibidores de PCR naturalmente presentes en las muestras, o la coincidencia inesperada de los cebadores con el genoma de una especie no secuenciada. Con el objetivo principal de optimizar el método de PCR en tiempo real con SYBR Green para detectar H5N1 en muestras de tejido de hurón y mono (macaco rhesus chino), examinamos varios pares de cebadores específicos del gen H5N1 y probamos su capacidad para detectar de manera sensible y específica los transcritos de H5N1 en los tejidos animales infectados, luego evaluamos el rendimiento y la calidad del ARN comparando los valores de Ct obtenidos del método estándar Trizol, y cuatro kits de aislamiento de ARN comúnmente utilizados con pequeñas modificaciones, incluyendo Roche High Pure, Ambion RNAqueous, BioMIGA EZgene y Qiagen RNeasy. Los resultados indicaron que