El propóleos y sus extractos muestran un amplio espectro de actividad biológica. Debido a la necesidad de utilizar altas temperaturas y alta polaridad en el eluente, los extractos obtenidos están agotados de compuestos activos. El nuevo método de separación en frío permite obtener un producto cualitativamente mejor que contiene una serie de compuestos químicos ausentes en los extractos obtenidos mediante métodos de alta temperatura. El propósito de nuestro estudio fue evaluar la actividad biológica de los extractos de propóleos producidos con el método de separación en frío en cuatro líneas celulares de cáncer de mama femenino: MDA-MB-231, MDA-MB-468, MCF-7 y T-47D. Los resultados de la viabilidad celular del cáncer de mama se obtuvieron utilizando la prueba MTT. Los extractos de propóleos al 75 y 80% mostraron una citotoxicidad similar contra las células cancerosas, siendo la fracción de polifenoles al 75% ligeramente más negativa para las células. Los extractos de propóleos a concentraciones de 50, 75 y 100 ug/mL redujeron significativamente la viabilidad celular. Con la excepción de la línea MDA-MB-231, la viabilidad celular también disminuyó después de la incubación con una concentración de 25 ug/mL. Nuestros resultados sugieren que los extractos de propóleos obtenidos con el método de separación en frío pueden considerarse compuestos prometedores para la producción de suplementos que promuevan la salud.