El proceso de especiación ocurre mediante la evolución de diversas formas de aislamiento reproductivo entre taxones, incluyendo la inviabilidad de los híbridos. En este trabajo, se cruzaron experimentalmente cepas derivadas de poblaciones alopátricas del grupo de especies de Drosophila buzzatii para evaluar sus relaciones reproductivas y citogenéticas, y para contribuir a la comprensión del aislamiento reproductivo en este grupo de especies hermanas. Si bien los cruces intracepa fueron altamente fértiles, consideramos relevante discutir aquí las diferencias en fertilidad y fecundidad intraespecíficas e interespecíficas. Entre 30 cruces interespecíficos, alrededor del 63% fueron parcial o completamente estériles. El 53% de los cruces F1 interespecíficos (cruces F1 femeninos y masculinos) también fueron parcial o completamente estériles, en contraste con solo uno de los 24 cruces F1 intraespecíficos que fue parcialmente estéril. Un análisis de los cromosomas politénicos híbridos reveló sinapsis completa, excepto en los microcromosomas (VI) y en la región proximal del cromosoma X. La divergencia intraespecífica observada en este estudio y el grado variable de apareamiento cromosómico que se muestra aquí revelan parte de la complejidad del proceso de especiación pertinente al grupo de Drosophila buzzatii, lo cual es consistente con los diferentes rasgos estudiados en este grupo.