La lignina es un biopolímero abundante, al igual que la celulosa y la hemicelulosa. Así, este trabajo tuvo como objetivo aislar y caracterizar la lignina de aserrín de spp., un residuo lignocelulósico generado en grandes cantidades en los aserraderos, para evaluar su capacidad antioxidante. Se utilizó una perspectiva de biorefinería: la biomasa se fraccionó utilizando un tratamiento ácido-alcalino secuencial para recuperar los carbohidratos hemicelulósicos, preservando la fracción sólida rica en celulosa y aislando la lignina. La caracterización fisicoquímica de la lignina aislada se llevó a cabo utilizando análisis termogravimétrico (TGA), espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier (FTIR) y resonancia magnética nuclear (RMN), mientras que la propiedad antioxidante se evaluó empleando transferencia de electrones y utilizando ensayos DPPH y ABTS. Después del tratamiento ácido-alcalino secuencial, se recuperó el 68.15% de los carbohidratos hemicelulósicos utilizando un tratamiento ácido suave. El rendimiento específico de lignina fue del 69.38%, y la fracción sólida restante contenía el 60.42% de celulosa. La actividad antioxidante de la lignina se evaluó utilizando una prueba de radical DPPH, y mostró una inhibición del 81.58% y una IC de 60 g/mL. Para la prueba ABTS, la inhibición fue del 99.86%, y la IC fue de 7.39 ug/mL. Por lo tanto, la lignina aislada de aserrín residual de eucalipto utilizando tratamiento ácido-alcalino secuencial presentó propiedades antioxidantes interesantes, que deberían ser investigadas y evaluadas para diferentes aplicaciones.