Antecedentes: Al tratar pacientes con quemaduras extensas mediante láminas epidérmicas cultivadas, el principal problema es el tiempo necesario para su producción. El aislamiento convencional de queratinocitos se realiza habitualmente con tripsina. Utilizamos una modificación del método de aislamiento convencional para mejorar este proceso y aumentar el número de colonias a partir de la población de células epidérmicas aisladas. Objetivo: Comparar la acción de la tripsina y la termolisina en el aislamiento de queratinocitos utilizando prepucio de recién nacido. Métodos: Este método utilizó termolisina, ya que digiere selectivamente la unión dermoepidérmica. Tras la separación de la dermis, la epidermis fue digerida por tripsina para obtener una suspensión celular. Resultados: En comparación con el procedimiento convencional, estos experimentos demostraron que, en el grupo tratado con termolisina, la epidermis se desprendió fácilmente de la dermis, no hubo contaminación por fibroblastos y se observó un mayor número de colonias de queratinocitos, lo que representó una diferencia estadísticamente significativa. Conclusión: El número de colonias en el grupo de termolisina fue significativamente mayor que en el grupo de tripsina.