Ante el calentamiento global y el rápido agotamiento de los combustibles fósiles, las microalgas surgen como prometedoras materias primas para la producción sostenible de biocombustibles. La tinción con rojo Nilo actúa como una herramienta de diagnóstico rápido para medir la cantidad de lípidos convertibles en biodiésel que acumulan las células. Es necesario desarrollar un procedimiento de tinción más uniforme. En su primera fase, este estudio examinó la dependencia de la fluorescencia del rojo Nilo de microalgas (Tetraselmis suecica) en términos de sus variables de tinción más pertinentes. Se generó un modelo cuadrático de superficie que describía con éxito la intensidad de fluorescencia del rojo Nilo como una función compuesta de sus variables (r2=0,86). Se demostró que la concentración celular tenía un efecto significativo sobre la intensidad de fluorescencia. Hasta cierto umbral, se demostró que la intensidad de fluorescencia aumentaba con la concentración de colorante rojo Nilo. En su segunda fase, el estudio revisó los resultados de estudios anteriores sobre el rojo Nilo para dilucidar algunos de los mecanismos fundamentales que subyacen a la difusión de las moléculas de colorante rojo Nilo en las células microalgales y su posterior interacción con los lípidos intracelulares. A través del proceso de revisión, pudimos desarrollar un marco simple que proporcionó un conjunto de directrices para la estandarización del procedimiento de tinción con rojo Nilo en diferentes especies de microalgas.