La tolerancia al frío de las moscas de la fruta adultas ha sido ampliamente estudiada, pero el efecto de las temperaturas bajo cero en las etapas inmaduras sigue siendo poco investigado, especialmente en lo que respecta a diferentes poblaciones. En este estudio, estimamos la respuesta aguda al estrés por frío de tres poblaciones geográficamente divergentes de moscas de la fruta mediterráneas originarias de Grecia (Creta, Volos) y Croacia (Dubrovnik) al exponer las etapas inmaduras (huevos, larvas, pupas) a temperaturas bajo cero. Primero determinamos el LT para cada etapa inmadura tras una hora de exposición a diferentes temperaturas. Luego, los huevos, larvas y pupas de las diferentes poblaciones fueron expuestos a su respectivo LT durante una hora (LT = -11 grados C, LT = -4.4 grados C, LT = -5 grados C para huevos, larvas y pupas, respectivamente). Nuestros resultados demuestran que las poblaciones respondieron de manera diferente dependiendo de su etapa de desarrollo. La población de Dubrovnik fue la más susceptible al frío en la etapa de huevo, mientras que en la de Creta fue en la etapa larval y pupal. La población de Volos fue la más tolerante al frío en todas las etapas de desarrollo. La etapa de huevo fue la más tolerante al frío, seguida de las pupas y finalmente las larvas errantes de 3er instar. Este estudio contribuye a comprender la respuesta al estrés por frío de esta plaga seria y proporciona datos sobre parámetros importantes que determinan su establecimiento exitoso en entornos desfavorables, con énfasis en la expansión de su rango hacia las regiones del norte, más templadas, de Europa.