L. (trébol blanco) es una leguminosa perenne de amplia distribución, que se considera uno de los forrajes más importantes por su alto contenido de proteínas y excelente palatabilidad. Las bajas temperaturas limitan la distribución y productividad del trébol blanco, reduciendo así sus retornos económicos. Los factores de transcripción WRKY son reguladores clave en la defensa contra el estrés y están involucrados en múltiples respuestas al estrés abiótico en las plantas. En este estudio, se clonó un gen inducible por frío llamado de trébol blanco. La proteína TrWRKY41 se localiza predominantemente en el núcleo y funciona como una proteína hidrofílica y ácida. Bajo estrés por frío, las plantas sobreexpresadas tenían contenidos de clorofila (CHL) y prolina (Pro) significativamente más altos, actividades de catalasa (CAT), peroxidasa (POD) y superóxido dismutasa (SOD) significativamente aumentadas, y el contenido de malondialdehído (MDA) disminuyó significativamente. En comparación con el tipo salvaje, las plantas sobreexpresadas mostraron una mejor tolerancia al frío. Además, se predijeron genes objetivo aguas abajo del factor de transcripción utilizando alineación BLAST y el software AlphaFold2 (versión 0.2.0), la expresión de seis genes, incluidos , , y , se reguló significativamente al alza bajo estrés por frío. Esto sugiere que puede mejorar la tolerancia al frío en Arabidopsis al activar la cascada ICE-CBF-COR. Este estudio proporciona genes candidatos para la investigación sobre la mejora de la tolerancia al frío del trébol blanco.