Un concepto para la selección de ARNt supresores de codones basado en la visualización de ribosomas de lectura en un sistema de traducción sin células compartimentado in vitro
Autores: Atsushi, Ogawa; Masayoshi, Hayami; Shinsuke, Sando; Yasuhiro, Aoyama
Idioma: Inglés
Editor: Hindawi Publishing Corporation
Año: 2012
Disponible con Suscripción Virtualpro
Artículos
Categoría
Ciencias Naturales y Subdisciplinas
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CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
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Aquí se presenta un concepto para la selección in vitro de ARNt supresores. Utiliza un pool de plantillas de dsADN en micelas compartimentadas de agua en aceite. La plantilla contiene un desencadenante de transcripción/traducción, un codón de parada ámbar, y otro desencadenante de transcripción para el gen aleatorizado de bucle anticodón o anticodón para tRNASer. Tras la transcripción se generan dos tipos de ARN, un ARNt y un ARNm traducible (ARNm-ARNt). Cuando el ARNt suprime el codón de parada (UAG) del ARNm, la proteína de longitud completa obtenida tras la traducción permanece unida al ARNm (despliegue ribosómico de lectura) que contiene la secuencia del ARNt. De este modo, se pueden seleccionar (amplificar) los ARNt supresores activos y leer sus secuencias. El anticodón enriquecido (CUA) era complementario al codón de parada UAG y el bucle de anticodón enriquecido era el mismo que el del tRNASer natural.
Descripción
Aquí se presenta un concepto para la selección in vitro de ARNt supresores. Utiliza un pool de plantillas de dsADN en micelas compartimentadas de agua en aceite. La plantilla contiene un desencadenante de transcripción/traducción, un codón de parada ámbar, y otro desencadenante de transcripción para el gen aleatorizado de bucle anticodón o anticodón para tRNASer. Tras la transcripción se generan dos tipos de ARN, un ARNt y un ARNm traducible (ARNm-ARNt). Cuando el ARNt suprime el codón de parada (UAG) del ARNm, la proteína de longitud completa obtenida tras la traducción permanece unida al ARNm (despliegue ribosómico de lectura) que contiene la secuencia del ARNt. De este modo, se pueden seleccionar (amplificar) los ARNt supresores activos y leer sus secuencias. El anticodón enriquecido (CUA) era complementario al codón de parada UAG y el bucle de anticodón enriquecido era el mismo que el del tRNASer natural.